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INVESTIGACION CLINICA: Streptococcus mitis

INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL.ESCUELA NACIONAL DE MEDICINA Y HOMEOPATA.
SECCIN DE ESTUDIOS DE POSTGRADO E INVESTIGACIN.
ESPECIALIZACIN EN TERAPUTICA HOMEOPTICA OPCIN ODONTOLOGA

 


Efecto antimicrobiano in vitro de la tintura de rnica montana y Calndula officinalis sobre Streptococcus mitis.

AUTORES
C. D. Francisco Fernando Baos Romn*, C. D. Ma. Ernestina Moctezuma Lechuga**, C. D. Jos M. Delgado Ruiz***, Q. B. P. Jos Tomas Hernndez Mndez****.

*Tesista, Egresado de la Especializacin en Teraputica Homeoptica, opcin Odontologa ** Docente e Investigador de la ENMyH.*** Docente e Investigador de la ENMyH., Becario EDD y SIBE COFAA **** Docente e Investigador de la ENCB.
Guillermo Massieu Helguera N 239 Fracc. La Escalera, Ticomn, D. F., C. P. 07320/ Telfono: 57 29 60 00 Ext. 55544 y 55 86 31 03
Efecto antimicrobiano in
   vitro de la tintura de rnica montana y Calndula officinalis sobre Streptococcus mitis.
*Baos Romn Francisco Fernando, **Moctezuma Lechuga Maria Ernestina,*** Delgado Ruiz Jos M., ****Hernndez Mndez Jos Tomas

 

RESUMEN
Como sabemos, la placa dentobacteriana (PDB) conduce diversos microorganismos que son factores predisponentes de diversas patologas bucales como la enfermedad periodontal y la caries, esta ltima relacionada con el aumento de estreptococos principalmente Streptococcus mitis.

La teraputica homeoptica en odontologa hasta el da de hoy es terreno frtil en investigacin ya que existen pocas y de estas, algunas, aplicadas en forma aloptica. Con respecto a la teraputica homeoptica existen diversos remedios que inhiben algunos microorganismos, de entre ellos se eligi a rnica montana y Calndula officinalis debido a que sus principios activos tienen propiedades bactericidas.

Este trabajo forma parte del Proyecto de Investigacin Estudio in vitro de la Accin de los Medicamentos Homeopticos en la Placa Dentobacteriana, clave CGPI 20010119.

La investigacin es prospectiva, longitudinal, comparativa y experimental. Se estudian in vitro las cepas de Enterococcus faecalis, Escherichia coli ATCC 25922; Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853; Staphylococcus aureus ATCC 25923; Streptococcus mutans G536; Streptococcus mutans LRA, Streptococcus mitis; Streptococcus sanguis. Adems se contrastan en medios de cultivo Mueller Hinton con sangre de carnero desfibrinada con tinturas y diluciones homeopticas a 1:2; 1:4, 1:8; 1:16, 1:32, 1:64; 1:128, tambin se sustituye en los medios de cultivo el agua por medicamento homeoptico administrado en la forma antes descrita. Asimismo se realizan pruebas en sensidiscos impregnados con: rnica montana; Avena sativa; Calndula officinalis; Echinacea angustifolia; Rumex crispus y Sepia officinalis. El medio de cultivo con rnica montana en tintura y en diluciones 1:2; 1:4, 1:8 muestra inhibicin y no as las diluciones 1:16, 1:32, 1:64; 1:128. El sensidisco impregnado con tintura de rnica montana muestra un halo de 2 cm; el de Calndula officinalis indica un halo de 1cm, al igual que el testigo de alcohol de 87. El resto de los medicamentos en ambas pruebas mostraron crecimiento bacteriano.

*Tesista, Egresado de la Especializacin en Teraputica Homeoptica, opcin Odontologa / ** Docente e Investigador de la ENMyH. / *** Docente e Investigador de la ENMyH., Becario EDD y SIBE COFAA / **** Docente e Investigador de la ENCB.

INTRODUCCIN
Ms de 300 aos despus de que Anthony Van Leeuwenhoek observara los 'animalucos' extrados de las limaduras dentales, hoy todava se intenta descifrar la estructura y actividad biolgica de las bacterias asociadas con la denticin humana[i]. Durante el siglo XIX y principios del siglo XX existieron varias teoras respecto a la etiologa de la caries y enfermedad periodontal, entre estas se encuentra la del mdico Britnico William Hunter, quien fue el primero en describir la conexin entre la sepsis oral y las infecciones de sitios distantes lo que origino la teora de la infeccin focal. Las infecciones focales son infecciones que se localizan en diferentes partes del cuerpo humano y son causadas por microorganismos (o sus productos) que habitan en la cavidad oral, siendo el foco responsable del inicio y de progresin de varias enfermedades como la artritis, lcera pptica y apendicitis [ii], [iii], [iv]. Para vislumbrar el crecimiento bacteriano debemos comenzar por el desarrollo bacteriano en el ser humano, este da inicio 8 horas despus del parto, en el cual el recuento bacteriano se incrementa de forma rpida. La flora microbiana en esta etapa consiste en lactobacilos, estreptococos, Staphylococcus, Enterococcus, Veillonellae, Neisseria y coliformes. A pesar de que la composicin bacteriana de la flora oral vara durante los primeros das de vida, los estreptococos con regularidad son los primeros habitantes en la cavidad oral. Estos predominan en un 70% de la cuenta bacteriana viable, durante la niez y la adolescencia. Las bacterias se incrementan hasta la edad adulta, en la cual varan un poco y se asocian con varias enfermedades incluyendo la enfermedad periodontal y la caries. Esto se debe a que la placa dental o placa dentobacteriana, que es una acumulacin heterognea se adhiere a los dientes o se sita en el espacio gingivodental, esta compuesta por una comunidad microbiana rica en bacterias aerobias y anaerobias, rodeadas por una matriz intercelular de polmeros de origen microbiano y salival [v]. De esta comunidad el grupo de Estreptococos orales o viridans incluye a los grupos: Streptococcus mutans y Streptococcus oralis, este ltimo incluye al Streptococcus mitis, que es una bacteria comensal de la cavidad oral y nasal, son cocos gram + esfricos o elipsoides que forman largas cadenas y producen cido a partir de la fermentacin de la glucosa, maltosa, la sacarosa y a veces la lactosa pero del manitol, la inuliona, el sorbitol, el glicerol y la xilosa[vi]. Se han descrito dos biotipos. El biotipo 1 coloniza la mucosa de la cavidad bucal y forma parte inicial de la placa cariognica de superficies libres, el biotipo 2 se localiza en el dorso de la lengua. El Streptococcus mitis se asocia con enfermedades sistmicas, incluyendo la endocarditis infecciosa, bacteremia y neumona[vii]. Los estreptococos orales son de mayor importancia debido a que estas bacterias son patgenos significativos en pacientes inmuno-comprometidos y en los neonatos.[viii]

El grupo de Streptococcus mutans fue descrito por Clarke en 1924, a partir de caries de dentina. Por lo regular se asla de todos los individuos, siempre y cuando sean dentados o indemnes a la caries. Su primer hbitat es la superficie dentaria del hombre, pero tambin se pueden identificar en las fauces. Su presencia en la placa bacteriana se ve favorecida por una alta ingesta de sacarosa en la dieta.

La incidencia del S. mutans en la etiologa de la caries dental ha sido demostrada en lesiones cariosas despus de su introduccin en la cavidad oral de animales libres de grmenes.[ix] Con la prdida dental algunas cepas de estreptococos se reducen. En pacientes edentulos, sin dentaduras artificiales, algunas especies de estreptococos se reducen o en forma virtual se eliminan, a pesar de elevarse un poco en niveles pre-extraccin dental y despus de la colocacin de dentaduras[x].

MATERIALES
Estufa de incubacin, asa de siembra, balanza, autoclave, material de laboratorio, hisopos estriles.

MEDIOS DE CULTIVO: Caldo Mueller Hinton (CMH); Gelosa Mueller Hinton con sangre de carnero desfibrinada (MHS);Gelosa Mueller Hinton con sangre de carnero desfibrinada con medicamento homeoptico (MHScMH). CEPAS: Enterococcus faecalis, Escherichia coli ATCC 25922; Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853; Staphylococcus aureus ATCC 25923; Streptococcus mutans G536; Streptococcus mutans LRA, Streptococcus mitis; Streptococcus sanguis. SENSIDISCOS: Alcohol de 87 (Testigo); alcohol de 90 (Testigo). TINTURAS: rnica montana; Avena sativa; Calndula officinalis; Echinacea angustifolia; Rumex crispus; Sepia officinalis. Aguja de diseccin, pinzas de curacin; cajas de Petri de vidrio de 60 mm de dimetro; micropipeta con capacidad de 20 L.; puntas desechables para micropipeta; discos de papel filtro Whatman 2 de 6 mm de dimetro; cinta testigo.

METODOS

Utilizando Gelosa Mueller Hinton con Sangre de Carnero Desfibrinada, Gelosa Mueller Hinton con Sangre de Carnero Desfibrinada con Medicamento Homeoptico (mhscmh), el procedimiento fue:

Limpiar el campo de trabajo, pesar el agar segn las especificaciones del fabricante. Medir el agua. Dejar hidratar el agar. Calentar el agar en el mechero, hasta su disolucin. Hervir por un minuto. Tapar. Esterilizar en el autoclave a 121 C, durante 15 minutos. Dejar que baje la presin a 0, dejar enfriar en 50 C. Agregar 5ml de sangre por cada 100 ml de cultivo y mezclar. Vaciar la gelosa en las cajas de Petri, con cuidado hasta que ambos extremos se unan. Tapar el medio de cultivo. Dejar gelificar, rotular con las iniciales del medio de cultivo. Someter a prueba de esterilidad incubando los medios a 37 C durante 24 horas. Refrigerar hasta su uso.

Para los medios con medicamento homeoptico sustituir el agua por tintura y diluciones de medicamento homeoptico con una relacin de agua-medicamento de: 1:2; 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64; 1:128.

PREPARACIN DE LOS SENSIDISCOS

Limpiar y desinfectar el campo de trabajo; colocar los sensidiscos en la caja de Petri con ayuda de la aguja de diseccin y las pinzas de curacin. Tapar los bordes de la caja con cinta testigo, esterilizar en el autoclave a 121C, durante 15 minutos. Colocar los discos a 37C durante 24 horas. Colocar en cada disco 10 L del medicamento homeoptico. Seguir el mismo procedimiento para todos los medicamentos. Dejar secar los sensidiscos por espacio de 3 a 4 horas en la estufa. Mantener los disco a temperatura ambiente hasta su uso.

PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD

PREPARACIN DEL INOCULO: Inocular en un tubo con CMH una asada de la cepa. Incubar a 37C hasta que alcance la turbiedad equivalente al tubo 0.5 del nefelmetro de McFarland.

SIEMBRA DEL INOCULO: Introducir un hisopo estril en el tubo con la cepa estandarizada, exprimir el hisopo presionando en las paredes del tubo. Sembrar masivamente en [MHS] y (MHScMH) (Figura 1); dejar secar. En la caja de MHS colocar lo sensidiscos con las pinzas de curacin y aguja de diseccin, rotular la base de la caja con un nmero para identificar que medicamento es (Figura 2 ).

TABLA_CIRCULOS

RESULTADOS

DETERMINACIN DE LA DILUCIN MINIMA INHIBITORIA EN MHS

En la caja con tintura de rnica montana y diluciones a 1:2; 1:4 y 1:8 se observ inhibicin de Streptococcus mitis, no as en las diluciones 1:16; 1:32; 1:64; 1:128.

DETERMINACIN DE LA SUSCEPTIBILIDAD CON SENSIDISCOS, EN MHSCMH.

Streptococcus mitis frente a rnica montana mostr un halo de 2cm, Calndula officinalis y el alcohol de 87 expusieron un halo de 1cm. El resto de las tinturas estudiadas no tuvieron ningn efecto sobre las cepas trabajadas.

 

                    Tintura

Resultado

1. Tintura Calndula off.

Halo de 1cm

2. Tintura rnica montana

Halo de 2cm.

3. Tintura Avena sativa

Creci

4. Tintura Echinacea a.

Creci

5. Alcohol de 90 (Testigo)

Creci

6. Tintura Rumex crispus

Creci.

7. Alcohol de 87 (Testigo)

Halo de 1 cm.

8. Tintura Sepia off.

Creci

DISCUSIN

El uso tradicional que se le ha dado a rnica montana es como antiinflamatorio[1], [2], [3], analgsico[4], antibacteriano[5], [6], antimictico[7], antiviral17, regenerador de tejido17, [8] entre otras propiedades.

Para que un estudio etnobotnico - farmacolgico in vitro sea eficaz debe iniciar desde el potencial antibacteriano y antimictico de los principios puros de las plantas (principios activos) o con los extractos crudos (tinturas)[9]. En ambos se utiliza una prueba para determinar la susceptibilidad antimicrobiana en las pruebas de dilucin y en discos o en difusin en agar. En la actualidad en odontologa no se han realizado suficientes estudios in vitro sobre rnica montana contra microorganismos de la placa dentobacteriana17.

La actividad antimicrobiana in vitro de rnica montana no se ha investigado en forma amplia. Por lo tanto se decidi evaluar su actividad antimicrobiana in vitro, no se realiz de forma comparativa con antibiticos porque se desconoce la molcula responsable del fenmeno de la formacin del halo, por lo que no se puede saber la concentracin de dicha molcula, por lo tanto no se puede establecer una concentracin mnima inhibitoria (MIC), ni la potencia de dicha molcula.

La literatura menciona un reporte sobre la actividad antimicrobiana in vitro de rnica montana17.En dicho reporte se utilizan varias cepas entre ellas se incluyen: Staphylococcus aureus ATCC 25923; Streptococcus mutans Ingbritt 1600; Streptococcus mutans OMZ 175.

En el presente estudio se utilizan las cepas de Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922, Streptococcus mutans G536, Lactobacillus acidophilus, Streptococcus mitis, Streptococcus mutans LRA, Enterococcus faecalis; comparando ambos estudios, se determina que el primero 17 esta enfocado hacia microorganismos del periodonto, mientras que el presente estudio se enfoca hacia microorganismos de la placa dentobacteriana.

Comparando la actividad antimicrobiana de ambos estudios en el primer estudio los grupo control y el grupo de rnica montana no muestran inhibicin en ninguna de las cepas estudiadas. En el presente estudio la dilucin mnima bactericida de rnica montana mostr resultados favorables en forma de tintura y en las diluciones 1:2 y 1:4 contra Streptococcus mitis. La determinacin de la susceptibilidad con sensidiscos, Streptococcus mitis versus rnica montana mostr un halo de 2cm. Calndula officinalis y el alcohol de 87 mostraron un halo de 1cm contra Streptococcus mitis.

CONCLUSIONES

Se concluye que de los medicamentos estudiados in vitro solo rnica montana y Calndula officinalis mostraron eficacia. Conjuntamente es necesario que se realicen ms investigaciones con ms medicamentos y especies de cepas. Asimismo deben hacerse estudios in vitro al mismo tiempo con estudios in vivo y clnicos.

 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS


[1] KlaasCA. Wagner G, Laufer S, Sosa S, Della Logia R, Bomme U, Pahl HL, Merfort I. Studies on the anti-inflammatory activity of phytopharmaceuticals prepared from rnica flowers. Planta Med. 2002. May; 68(5):385-91.

[2] Knuesel O, Weber M, Suter A. rnica montana gel in osteoarthritis of the knee: an open, multicenter clinical trial. Adv Ther. 2002 Sep-Oct; 19(5):209-18.

[3] Oberbaum M, Schreiber R, Rosenthal C, Itzchaki M. Homeopathic treatment in emergency medicine: a case series.Homeopathy. 2003. Jan; 92(1): 44-7.

[4] Jeffrey SL, Belcher HJ. Use of Arnica to relieve pain after carpal tunnel release surgery. Altern Ther Health Med. 2002. Mar-Apr; 8(2): 66-8.

[5] Lauk L, Lo Bue AM, Milazzo I, Rapisarda A, Blandino G. Antibacterial activity of medicinal plants extracts against periodontophatic bacteria. Phytother Res. 2003 Jun; 17(6): 599-604.

[6] Schmidt TJ, Brun R, Willuhn G, Klaid SA. Anti-trypanosomal activity of helanin and some structurally related sesquiterpene lactones. Planta Med. 2002 Aug; 68(8):750-1.

[7] Koo H, Gomes BP, Rosalen PL, Ambrosano GM, Park YK, Cury JA. in vitro antimicrobial activity of propolis and rnica montana against oral pathogens. Arch Oral Biol 2000 Feb; 45:141-8.

[8] Alonso D, Lazarus MC, Baumann L. Effects of topical arnica gel on post laser treatment bruises. Dermatol Surg. 2002 Aug; 28(8): 686-8.

[9] Cowan Marjorie Murphy. Plant products as antimicrobial agents. Clinical Microbiology Reviews. 1999; 12(4): 564-582.

[10] Schuster George S. Oral flora and pathogenic organisms. Infectious Disease Clinics of North America. 1999; 13(4): 757-774.

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[19] Cowan Marjorie Murphy. Plant products as antimicrobial agents. Clinical Microbiology Reviews. 1999; 12(4): 564-582.



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